本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA），專用于定量檢測大鼠血清、血漿、組織勻漿中的 KISS1/Kisspeptin 1 蛋白濃度。檢測范圍覆蓋 0.313-20 ng/mL，靈敏度達 0.16 ng/mL，適用于腫瘤轉(zhuǎn)移抑制、生殖軸調(diào)控、細胞侵襲及癌癥研究等領(lǐng)域。
產(chǎn)品名稱：大鼠腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因KISS1蛋白elisa試劑盒
英文名稱：KISS1/Kisspeptin 1 ELISA Kit
產(chǎn)品規(guī)格：48T/96T
產(chǎn)品貨號：CS-5200E
核心原理：
大鼠腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因 KISS1 蛋白 (KISS1/Kisspeptin 1) elisa 試劑盒的原理是?雙抗體夾心法?，通過固相載體捕獲抗原，再用酶標(biāo)記的檢測抗體進行識別，最后通過底物顯色反應(yīng)來定量檢測。
?固相化?：微孔板預(yù)先包被抗大鼠 KISS1 抗體。
?結(jié)合?：加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣本，KISS1 被固相抗體捕獲。
?檢測?：加入生物su化的抗大鼠 KISS1 抗體和 HRP 標(biāo)記的親和素，形成 "抗體 - 抗原 - 酶標(biāo)抗體" 復(fù)合物。
?顯色?：加入 TMB 底物，被 HRP 催化后由藍色變?yōu)辄S色。
?測定?：用酶標(biāo)儀在 450nm 波長測定吸光度 (OD 值)，濃度與 OD 值成正比。
樣本要求：
1. 樣本類型與處理
?血清?：使用無熱原/內(nèi)毒素試管采集，避免溶血或脂血。1000×g離心10分鐘分離血清，-20℃保存，避免反復(fù)凍融。
?血漿?：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝，離心后取上清。
?細胞上清?：1000×g離心10分鐘去除顆粒，-70℃保存。
?組織勻漿?：生理鹽水勻漿后離心取上清，-20℃保存。
2. 注意事項
樣本中禁止添加NaN3，以免抑制HRP活性。
細胞培養(yǎng)上清可能因細胞狀態(tài)等因素導(dǎo)致檢測波動，建議設(shè)復(fù)孔。
操作步驟：
1. 試劑準(zhǔn)備
將試劑盒所有組分平衡至室溫（20–25℃，≥30min）；濃縮洗滌液按 1:19 稀釋配制工作液。
標(biāo)準(zhǔn)品用標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液復(fù)溶，梯度稀釋，配置系列濃度梯度標(biāo)準(zhǔn)溶液，備用。
2. 實驗流程
加樣：設(shè)置空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、樣本孔，每孔加入 100 μL 對應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)品 / 待測樣本，封板，37℃恒溫孵育 90 min。
洗滌：棄凈孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌工作液，靜置 30 s，甩干拍凈，重復(fù)洗滌 5 次。
加酶結(jié)合物：每孔加入 100 μL HRP 標(biāo)記檢測抗體，封板混勻，37℃孵育 60 min。
洗滌：重復(fù)上述洗滌步驟 5 次，拍干微孔。
顯色：每孔避光加入 90 μL TMB 底物顯色液，輕柔混勻，37℃避光顯色 15 min。
終止：按同等順序每孔快速加入 50 μL 終止液，輕晃混勻，溶液由藍轉(zhuǎn)黃。
讀數(shù)：15 min 內(nèi)，酶標(biāo)儀 450 nm 波長測定各孔 OD 值，擬合標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣本含量。
3. 關(guān)鍵質(zhì)控要點
全程孵育使用專用封板膜，防止液體蒸發(fā)、交叉污染。
洗滌充分為實驗核心，殘留洗液易造成背景偏高、假陽性。
TMB 顯色液避光儲存，現(xiàn)用現(xiàn)加，嚴(yán)禁接觸氧化劑。
加終止液順序需與顯色加樣一致，避免局部色差、綠色殘留。
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