產(chǎn)品簡介：
本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA），專用于定量檢測大鼠血清、血漿、組織勻漿及細(xì)胞上清液中的基質(zhì)金屬蛋白酶 9 / 明膠酶 B（MMP-9/Gelatinase B）蛋白濃度。檢測范圍覆蓋 0.313-20 ng/mL，靈敏度達(dá) 0.16 ng/mL，適用于細(xì)胞外基質(zhì)降解、腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移及炎癥反應(yīng)研究等領(lǐng)域。
產(chǎn)品名稱：大鼠基質(zhì)金屬蛋白酶9/明膠酶Belisa試劑盒
英文名稱：MMP-9/Gelatinase B ELISA Kit
產(chǎn)品規(guī)格：48T/9
檢測原理：
大鼠基質(zhì)金屬蛋白酶 9 / 明膠酶 B (MMP-9/Gelatinase B) ELISA 試劑盒的原理是?雙抗體夾心法?，通過固相載體捕獲抗原，再用酶標(biāo)記的檢測抗體進(jìn)行識別，最后通過底物顯色反應(yīng)來定量檢測。
?固相化?：微孔板預(yù)先包被抗大鼠 MMP-9 抗體。
?結(jié)合?：加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣本，MMP-9 被固相抗體捕獲。
?檢測?：加入生物su化的抗大鼠 MMP-9 抗體和 HRP 標(biāo)記的親和素，形成 "抗體 - 抗原 - 酶標(biāo)抗體" 復(fù)合物。
?顯色?：加入 TMB 底物，被 HRP 催化后由藍(lán)色變?yōu)辄S色。
?測定?：用酶標(biāo)儀在 450nm 波長測定吸光度 (OD 值)，濃度與 OD 值成正比。
實(shí)驗(yàn)步驟?：
?試劑準(zhǔn)備?：將試劑盒平衡至室溫(20-25℃)，洗滌緩沖液按1:19稀釋。標(biāo)準(zhǔn)品梯度稀釋至所需濃度。
?加樣?：每孔加入100μL標(biāo)準(zhǔn)品或樣本，37℃孵育90分鐘。
?洗滌?：棄去液體，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后甩干，重復(fù)5次。
?加檢測抗體?：每孔加入100μL檢測抗體-HRP，37℃孵育60分鐘。
?洗滌?：同步驟3。
?顯色?：每孔加入90μL TMB底物A+B混合液，37℃避光孵育15分鐘。
?終止?：每孔加入50μL終止液，立即搖勻（顏色由藍(lán)變黃）。
?檢測?：450nm波長測定吸光度(OD值)，15分鐘內(nèi)完成。
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操作步驟?：
1.試劑準(zhǔn)備
將試劑盒平衡至室溫（20-25℃），濃縮洗滌液按 1:20 稀釋備用。
標(biāo)準(zhǔn)品按說明書進(jìn)行梯度稀釋，配制系列濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線溶液。
2.實(shí)驗(yàn)流程
加樣：設(shè)置空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔，空白孔僅加稀釋液，其余孔分別加入標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣品，37℃孵育。
加酶標(biāo)抗體：除空白孔外，每孔加入酶標(biāo)抗體，輕輕混勻，37℃避光孵育。
洗滌：棄去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后甩干，重復(fù)洗滌 4-5 次，最后拍干殘留液體。
顯色：每孔加入 TMB 顯色液，37℃避光孵育，孔內(nèi)呈現(xiàn)藍(lán)色。
終止：每孔加入終止液，混勻后顏色由藍(lán)色轉(zhuǎn)為黃色。
檢測：在 450nm 波長下測定各孔 OD 值，15 分鐘內(nèi)完成讀數(shù)。
3.關(guān)鍵提示
實(shí)驗(yàn)全程嚴(yán)格控溫，孵育時使用封板膜避免蒸發(fā)。
洗滌需充分，否則易造成高背景、結(jié)果偏差。
顯色液需避光，終止順序與加樣順序保持一致，確保充分混勻。
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