產(chǎn)品簡介：
本試劑盒采用競爭法酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA），專用于定量檢測大鼠血清、血漿中的 FT4 含量。檢測范圍覆蓋 0.313-20 ng/mL，靈敏度達(dá) 0.16 ng/mL，適用于甲狀腺功能評估、甲亢甲減診斷、內(nèi)分泌紊亂及下丘腦 - 垂體 - 甲狀腺軸研究等領(lǐng)域。
產(chǎn)品名稱：大鼠游離甲狀腺素(FT4)elisa試劑盒
英文名稱：FT4 ELISA Kit
產(chǎn)品規(guī)格：48T/96T
產(chǎn)品貨號：CS-5257E
檢測原理：
大鼠游離甲狀腺素 (FT4) elisa 試劑盒的原理是?競爭法?，通過固相載體包被結(jié)合蛋白，樣本中抗原與酶標(biāo)抗原競爭結(jié)合結(jié)合位點，最后通過底物顯色反應(yīng)來定量檢測。
?固相化?：微孔板預(yù)先包被甲狀腺素結(jié)合蛋白。
?結(jié)合?：加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣本與酶標(biāo) FT4 混合液，F(xiàn)T4 與酶標(biāo) FT4 競爭結(jié)合固相結(jié)合蛋白。
?檢測?：無需額外加抗體，酶標(biāo) FT4 直接與固相載體形成復(fù)合物。
?顯色?：加入 TMB 底物，被 HRP 催化后由藍(lán)色變?yōu)辄S色。
?測定?：用酶標(biāo)儀在 450nm 波長測定吸光度 (OD 值)，濃度與 OD 值成反比。
實驗步驟?：
?試劑準(zhǔn)備?：將試劑盒平衡至室溫(20-25℃)，洗滌緩沖液按1:19稀釋。標(biāo)準(zhǔn)品梯度稀釋至所需濃度。
?加樣?：每孔加入100μL標(biāo)準(zhǔn)品或樣本，37℃孵育90分鐘。
?洗滌?：棄去液體，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后甩干，重復(fù)5次。
?加檢測抗體?：每孔加入100μL檢測抗體-HRP，37℃孵育60分鐘。
?洗滌?：同步驟3。
?顯色?：每孔加入90μL TMB底物A+B混合液，37℃避光孵育15分鐘。
?終止?：每孔加入50μL終止液，立即搖勻（顏色由藍(lán)變黃）。
?檢測?：450nm波長測定吸光度(OD值)，15分鐘內(nèi)完成。
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操作步驟?：
1.試劑提前室溫平衡 30 min，濃縮洗滌液按說明書稀釋配制。
2.設(shè)置空白孔、標(biāo)準(zhǔn)品孔、待測樣品孔，精準(zhǔn)加樣后封板。
3.37℃恒溫孵育結(jié)合反應(yīng)，結(jié)束后棄孔內(nèi)液體拍干。
4.加滿洗滌液浸泡清洗，重復(fù)洗板 3–5 次，去除未結(jié)合雜質(zhì)。
5.除空白孔外，每孔加入 HRP 酶結(jié)合物，再次 37℃溫育。
6.重復(fù)洗板流程洗凈游離酶標(biāo)抗體，保證背景干凈。
7.依次加入顯色液避光顯色，待梯度藍(lán)色清晰顯現(xiàn)。
8.加入終止液終止反應(yīng)，顏色由藍(lán)轉(zhuǎn)黃，即刻用酶標(biāo)儀讀取 OD 值。
9.根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合計算，得出樣本目標(biāo)物質(zhì)濃度。
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