產(chǎn)品簡介：
本試劑盒采用競爭法酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA），專用于定量檢測大鼠血清、血漿、尿液中的膠原吡啶交聯(lián)（PYD）含量。檢測范圍覆蓋 0.313-20 ng/mL，靈敏度達 0.16 ng/mL，適用于骨吸收、膠原降解及骨質(zhì)疏松癥研究等領(lǐng)域。
產(chǎn)品名稱：大鼠膠原吡啶交聯(lián)(PYD)elisa試劑盒
英文名稱：PYD ELISA Kit
產(chǎn)品規(guī)格：48T/96T
產(chǎn)品貨號：CS-5770E
檢測原理：
大鼠膠原吡啶交聯(lián) (PYD) ELISA 試劑盒的原理是?競爭法?，通過固相載體包被抗原，樣本中抗原與固相抗原競爭結(jié)合特異性抗體，最后通過底物顯色反應來定量檢測。
?固相化?：微孔板預先包被 PYD 人工抗原。
?結(jié)合?：加入標準品或樣本與特異性抗體混合液，PYD 與固相抗原競爭結(jié)合抗體。
?檢測?：加入 HRP 標記的二抗，與結(jié)合在固相載體上的抗體形成復合物。
?顯色?：加入 TMB 底物，被 HRP 催化后由藍色變?yōu)辄S色。
?測定?：用酶標儀在 450nm 波長測定吸光度 (OD 值)，濃度與 OD 值成反比。
實驗步驟?：
?試劑準備?：將試劑盒平衡至室溫(20-25℃)，洗滌緩沖液按1:19稀釋。標準品梯度稀釋至所需濃度。
?加樣?：每孔加入100μL標準品或樣本，37℃孵育90分鐘。
?洗滌?：棄去液體，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后甩干，重復5次。
?加檢測抗體?：每孔加入100μL檢測抗體-HRP，37℃孵育60分鐘。
?洗滌?：同步驟3。
?顯色?：每孔加入90μL TMB底物A+B混合液，37℃避光孵育15分鐘。
?終止?：每孔加入50μL終止液，立即搖勻（顏色由藍變黃）。
?檢測?：450nm波長測定吸光度(OD值)，15分鐘內(nèi)完成。
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操作步驟?：
1. 試劑準備
將試劑盒所有組分平衡至室溫（20–25℃，≥30min）；濃縮洗滌液按 1:19 稀釋配制工作液。
標準品用標準品稀釋液復溶，梯度稀釋，配置系列濃度梯度標準溶液，備用。
2. 實驗流程
加樣：設置空白孔、標準孔、樣本孔，每孔加入 100 μL 對應標準品 / 待測樣本，封板，37℃恒溫孵育 90 min。
洗滌：棄凈孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌工作液，靜置 30 s，甩干拍凈，重復洗滌 5 次。
加酶結(jié)合物：每孔加入 100 μL HRP 標記檢測抗體，封板混勻，37℃孵育 60 min。
洗滌：重復上述洗滌步驟 5 次，拍干微孔。
顯色：每孔避光加入 90 μL TMB 底物顯色液，輕柔混勻，37℃避光顯色 15 min。
終止：按同等順序每孔快速加入 50 μL 終止液，輕晃混勻，溶液由藍轉(zhuǎn)黃。
讀數(shù)：15 min 內(nèi)，酶標儀 450 nm 波長測定各孔 OD 值，擬合標準曲線計算樣本含量。
3. 關(guān)鍵質(zhì)控要點
全程孵育使用專用封板膜，防止液體蒸發(fā)、交叉污染。
洗滌充分為實驗核心，殘留洗液易造成背景偏高、假陽性。
TMB 顯色液避光儲存，現(xiàn)用現(xiàn)加，嚴禁接觸氧化劑。
加終止液順序需與顯色加樣一致，避免局部色差、綠色殘留。
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