產(chǎn)品簡介：
本試劑盒采用間接法酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA），專用于定量檢測大鼠血清、血漿中的抗環(huán)胍氨酸肽抗體（Anti-CCP-antibody）濃度。檢測范圍覆蓋 0.313-20 ng/mL，靈敏度達(dá) 0.16 ng/mL，適用于類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎診斷、自身免疫病及關(guān)節(jié)炎癥研究等領(lǐng)域。
產(chǎn)品名稱：大鼠抗環(huán)胍氨酸肽抗體elisa試劑盒
英文名稱：Anti-CCP-antibody ELISA Kit
產(chǎn)品規(guī)格：48T/96T
產(chǎn)品貨號：CS-5731E
檢測原理：
大鼠抗環(huán)胍氨酸肽抗體 (Anti-CCP-antibody) ELISA 試劑盒的原理是?間接法?，通過固相載體包被抗原，捕獲樣本中特異性抗體，再用酶標(biāo)記的二抗進(jìn)行識別，最后通過底物顯色反應(yīng)來定量檢測。
?固相化?：微孔板預(yù)先包被環(huán)胍氨酸肽抗原。
?結(jié)合?：加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣本，Anti-CCP-antibody 抗體與固相抗原結(jié)合。
?檢測?：加入 HRP 標(biāo)記的抗大鼠 IgG 二抗，與結(jié)合在固相載體上的抗體形成復(fù)合物。
?顯色?：加入 TMB 底物，被 HRP 催化后由藍(lán)色變?yōu)辄S色。
?測定?：用酶標(biāo)儀在 450nm 波長測定吸光度 (OD 值)，濃度與 OD 值成正比。
實(shí)驗(yàn)步驟?：
?試劑準(zhǔn)備?：將試劑盒平衡至室溫(20-25℃)，洗滌緩沖液按1:19稀釋。標(biāo)準(zhǔn)品梯度稀釋至所需濃度。
?加樣?：每孔加入100μL標(biāo)準(zhǔn)品或樣本，37℃孵育90分鐘。
?洗滌?：棄去液體，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后甩干，重復(fù)5次。
?加檢測抗體?：每孔加入100μL檢測抗體-HRP，37℃孵育60分鐘。
?洗滌?：同步驟3。
?顯色?：每孔加入90μL TMB底物A+B混合液，37℃避光孵育15分鐘。
?終止?：每孔加入50μL終止液，立即搖勻（顏色由藍(lán)變黃）。
?檢測?：450nm波長測定吸光度(OD值)，15分鐘內(nèi)完成。
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操作步驟?：
1.平衡試劑：試劑盒室溫平衡 30 min，濃縮洗滌液按比例稀釋備用。
2.加樣：設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)品孔、樣品孔，每孔加對應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)品 / 稀釋后樣本，封板溫育。
3.溫育反應(yīng)：37℃孵育 30–60 min，完成抗原抗體結(jié)合。
4.洗板：棄液甩干，洗滌液注滿每孔，浸泡后拍干，重復(fù)洗板3–5 次。
5.加酶結(jié)合物：除空白孔外，每孔加入 HRP 標(biāo)記抗體，封板 37℃再次溫育。
6.再次洗板：同上述洗板流程，洗凈未結(jié)合游離酶標(biāo)物。
7.顯色：每孔先后加入 A、B 顯色液，避光 37℃顯色 10–15 min。
8.終止讀數(shù)：加終止液終止反應(yīng)，顏色由藍(lán)變黃；立即用酶標(biāo)儀在對應(yīng)波長測定 OD 值。
9.結(jié)果計(jì)算：以標(biāo)準(zhǔn)品濃度、OD 值繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，換算樣本待測指標(biāo)濃度。
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