產(chǎn)品簡介：
本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA），專用于定量檢測大鼠組織勻漿、細(xì)胞提取物中的胱天蛋白酶 9（Casp-9）蛋白濃度。檢測范圍覆蓋 0.313-20 ng/mL，靈敏度達(dá) 0.16 ng/mL，適用于細(xì)胞凋亡、線粒體通路調(diào)控、腫瘤研究及神經(jīng)退行性疾病研究等領(lǐng)域。
產(chǎn)品名稱：大鼠胱天蛋白酶9(Casp-9)elisa試劑盒
英文名稱：Casp-9 ELISA Kit
產(chǎn)品規(guī)格：48T/96T
產(chǎn)品貨號：CS-5854E
檢測原理：
大鼠胱天蛋白酶 9 (Casp-9) ELISA 試劑盒的原理是?雙抗體夾心法?，通過固相載體捕獲抗原，再用酶標(biāo)記的檢測抗體進(jìn)行識別，最后通過底物顯色反應(yīng)來定量檢測。
?固相化?：微孔板預(yù)先包被抗大鼠 Casp-9 抗體。
?結(jié)合?：加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣本，Casp-9 被固相抗體捕獲。
?檢測?：加入生物su化的抗大鼠 Casp-9 抗體和 HRP 標(biāo)記的親和素，形成 "抗體 - 抗原 - 酶標(biāo)抗體" 復(fù)合物。
?顯色?：加入 TMB 底物，被 HRP 催化后由藍(lán)色變?yōu)辄S色。
?測定?：用酶標(biāo)儀在 450nm 波長測定吸光度 (OD 值)，濃度與 OD 值成正比。
實驗步驟?：
?試劑準(zhǔn)備?：將試劑盒平衡至室溫(20-25℃)，洗滌緩沖液按1:19稀釋。標(biāo)準(zhǔn)品梯度稀釋至所需濃度。
?加樣?：每孔加入100μL標(biāo)準(zhǔn)品或樣本，37℃孵育90分鐘。
?洗滌?：棄去液體，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后甩干，重復(fù)5次。
?加檢測抗體?：每孔加入100μL檢測抗體-HRP，37℃孵育60分鐘。
?洗滌?：同步驟3。
?顯色?：每孔加入90μL TMB底物A+B混合液，37℃避光孵育15分鐘。
?終止?：每孔加入50μL終止液，立即搖勻（顏色由藍(lán)變黃）。
?檢測?：450nm波長測定吸光度(OD值)，15分鐘內(nèi)完成。
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關(guān)鍵實操技巧：
1.加樣技巧
一次性換新槍頭，垂直貼孔壁低位加液；避免氣泡、飛濺交叉污染；整板加樣速度均勻統(tǒng)一。
2.溫育控溫
須37℃恒溫、封板膜嚴(yán)實防蒸發(fā)冷凝；時間嚴(yán)格卡死，過長背景高、過短信號低。
3.洗板核心
每孔注滿不溢出，浸泡≥30 s；拍干用無塵吸水紙，杜絕殘留；洗板不足直接高背景、假陽性。
4.樣本規(guī)范
杜溶血、脂濁、污染樣本；禁止反復(fù)凍融；嚴(yán)禁含 NaN?抑制 HRP 活性；濃度超標(biāo)只用試劑盒配套稀釋液。
5.顯色與讀數(shù)
全避光；整板顯色時長一致；加終止液立刻讀數(shù)，放置越久數(shù)值漂移越大。
6.基礎(chǔ)質(zhì)控
樣本、標(biāo)準(zhǔn)均做復(fù)孔；室溫潔凈避光操作；試劑分裝取用，減少反復(fù)開蓋失效。
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