公司細(xì)胞廣泛用于國內(nèi)院校的細(xì)胞生物學(xué)研究，作為實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目研究。下列產(chǎn)品詳細(xì)介紹：
產(chǎn)品名稱 | 生長特性 | 貨號 |
成骨肉瘤細(xì)胞；MG-63 | 貼壁生長 | EY-X63264 |
細(xì)胞名稱 成骨肉瘤細(xì)胞；MG-63
形態(tài)特性: 成纖維細(xì)胞樣
生長特性: 貼壁生長
特征特性: 該細(xì)胞源自14歲患有骨肉瘤的白人男性；聚-聚胞嘧啶核苷酸、和可以誘導(dǎo)產(chǎn)生高水平的干擾素。該細(xì)胞表達(dá)TGF-β受體Ⅰ和Ⅱ。
培養(yǎng)條件: MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)10%FBS；1%NEAA
傳代方法: 1:4~1:8傳代；每周換液2~3次。
傳代情況: C5
凍存條件: 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+8%DMSO+20%FBS
支原體檢測: 培養(yǎng)法（-）
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冷凍保存細(xì)胞之方法
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 儲(chǔ)存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過1 小時(shí)， 以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說明：
1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率；
5．如果細(xì)胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告：
一、分離與培養(yǎng)：
1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將成1mm3左右大小；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；
2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；
5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
Boc-L-谷氨酰RANK Ligand (R2) Antibody異戊硫
Boc-L-氨酸 N-丁二酰亞酯SimpleChIP® Mouse CXCL2 Promor Primers
BOC-D-氨酸Nur77 (D63C5) XP® Rabbit mAb鹽酸甲氧普
BOC-β-氨酸Nur77 (D63C5) XP® Rabbit mAb3,二甲基酸
(R)-N-BOC-代氨酸甲酯Ras Antibody2,二甲基噻唑
BOC-D-鹽酸鹽TRRAP (D2966) Antibody馬來酰亞
Nα-BOC-D-鹽酸鹽一水合物TRRAP (P2032) Antibody對甲氧基異酸酯
Boc-Arg(Mts)-OH·CHARAG1 (D36B3) Rabbit mAb酰酸異酯
BOC-硝基-L-p63 (D9L7L) XP® Rabbit mAbdelta-戊內(nèi)酯
N-叔丁氧羰基-N'-甲磺?；?-L- Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control (Alexa Fluor® 555 Conjuga)2-氨基己二酸水合物
BOC-對磺酰-D-Phospho-EphA2 (Tyr594) Antibody
叔丁氧羰基-N-beta-*基-L-天門冬酰Acetyl-α-Tubulin (Lys40) Antibody溴哌啶鹽
BOC-L-天門冬酰 酯GRB2 Antibody氨基酯
N-叔丁氧羰基-N'-氧蒽基 -L-天門冬酰 SQSTM1/p62 (D1Q5S) Rabbit mAb2-甲基-三氟
Boc-L-天冬氨酸 芐酯 Gα(o) Antibody亞硝酸丁酯
Boc-L-天冬氨酸 環(huán)己酯 TACE Antibody2,6-二羥基-基-甲基吡啶
叔丁氧羰基-L-天冬氨酸-叔丁酯 CDX2 Antibody2-溴己酸甲酯
酰嗎啉PLZF (D8G3G) Rabbit mAb酸酯
酰嗎啉(標(biāo)準(zhǔn)品)Phospho-SQSTM1/p62 (Ser403) (D8D6T) Rabbit mAb甲氧基
(S)-2,6-二叔丁氧羰基LIN28A (A177) Antibody十六烷
BOC-D-LIN28A (P22) Antibody二甲基鋅
BOC-L-甲酯EphB1 (5F10) Mouse mAb1-溴-5-戊烷
N-BOC-O-芐基-L-GRK2 Antibody吡啶-2.6-二羧酸二甲酯
BOC-L-SimpleChIP® TGFBR2 Promor Primers5-溴戊酸甲酯
Nα-叔丁氧羰基-N'-基-L-Phospho-ALK (Tyr1278/1282/1283) Antibody2-磺酰
Boc-D-Phospho-ALK (Tyr1278/1282/1283) AntibodyN-(2,環(huán)氧基)鄰二甲酰
BOC-L-甲酯Keratin 17/19 (D32D9) XP® Rabbit mAbN-基環(huán)己
N-叔丁氧羰基-O-(2-溴芐氧羰基)-L-Phospho-S6 Ribosomal Proin (Ser235/236) (D57.2.2E) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 555 Conjuga)1-羥基-甲基哌
Boc-O-叔丁基-L-GAD2 Antibody甘油縮甲
BOC-D-IL-17A (D1X7L) Rabbit mAb (Mouse Specific) (PE Conjuga)2-氨基-甲氧基并噻唑
BOC-L-MRP3/ABCC3 (D8V8J) Rabbit mAb2-硝基亞氨基咪唑烷
BOC-L-高氨酸Tuberin/TSC2 (D57A9) Rabbit mAb2-甲氧基-5-硝基-6-甲基吡啶
BOC-D-甲酯FABP5 (D1A7T) Rabbit mAb2-氨基-溴酮 鹽酸鹽
BOC FABP5 (D1A7T) Rabbit mAb2-氨基-4'-溴酮
Fmoc-L-氨酸Gα (pan) Antibody溴化亞酮
Fmoc-L-氨酸MAVS Antibody-2-吡啶甲酸
癌細(xì)胞；BIU-87形態(tài)特性: 上皮細(xì)胞樣生長特性: 貼壁生長Mouse PGE2 ELISA KIT
二氫葉還原酶缺陷型中國倉鼠卵巢細(xì)胞；CHO/dhFr-形態(tài)特性: 上皮細(xì)胞樣生長特性: 貼壁生長Rat PDGF-BB ELISA KIT
急性髓系細(xì)胞白血病細(xì)胞；KG-1形態(tài)特性: 淋巴母細(xì)胞樣生長特性: 懸浮生長Rat MMP-13 ELISA KIT
胚肺細(xì)胞VA13細(xì)胞；WI-38VA13亞系2RA形態(tài)特性: 成纖維細(xì)胞樣生長特性: 貼壁生長Porcine IL-13 ELISA KIT
幼蚊細(xì)胞；C6/36形態(tài)特性: 上皮細(xì)胞樣生長特性: 貼壁生長Mouse β-NGF ELISA KIT
內(nèi)膜腺癌(轉(zhuǎn)移)細(xì)胞；AN3CA形態(tài)特性: 上皮細(xì)胞樣生長特性: 貼壁生長Bovine IL-15 ELISA KIT
小鼠胚胎成纖維細(xì)胞；PA317形態(tài)特性: 成纖維細(xì)胞樣生長特性: 貼壁生長Rat IGF-1 ELISA KIT
成骨肉瘤細(xì)胞；MG-63小鼠凋亡相關(guān)因子配體(FASL)ELISA試劑盒bFGF-4ELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
小鼠纖連蛋白(FN)ELISA試劑盒bFGF-4ELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
小鼠FMS樣酪氨激酶3配體(Flt3L)ELISA試劑盒bFGF-6ELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
小鼠FMS樣酪氨激酶3(Flt3)ELISA試劑盒bFGF-6ELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
小鼠趨化因子(FK)ELISA試劑盒bFGF-9ELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
小鼠粒細(xì)胞集落刺激因子(G-CSF)ELISA試劑盒bFGF-9ELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
小鼠粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子(GM-CSF)ELISA試劑盒bFGFELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
小鼠糖蛋白130(gp130)ELISA試劑盒bFGFELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
操作步驟:
1、貼壁細(xì)胞的消化
①吸除培養(yǎng)液，用無菌 PBS、Hanks 液或無血清培養(yǎng)液洗滌細(xì)胞一次，以去除殘余的血清。
②加入少量 生物 Trypsin-EDTA solution，略蓋過細(xì)胞即可，室溫放置 0.5～2min， 不同的細(xì)胞消化時(shí)間有所不同。
③顯微鏡下觀察，細(xì)胞明顯收縮，并且肉眼觀察培養(yǎng)器皿底部發(fā)現(xiàn)細(xì)胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變
化；或者用槍吹打細(xì)胞發(fā)現(xiàn)細(xì)胞剛好可以被吹打下來，吸除細(xì)胞消化液。加入含血清的 *細(xì)胞培養(yǎng)液，吹打下細(xì)胞，即可直接用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
④如果發(fā)現(xiàn)消化不足，則加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果發(fā)現(xiàn)細(xì)胞消化時(shí)間過長，未及吹打細(xì)胞，細(xì)胞已經(jīng)有部分直接從培養(yǎng)器皿底部脫落， 直接用細(xì)胞培養(yǎng)液把細(xì)胞全部吹打下來。1000～2000g 離心 1min，沉淀細(xì)胞，盡量去除細(xì)胞消化液后，加入含血清的*培養(yǎng)液重新懸浮細(xì)胞，即可用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
2、組織的消化不同的組織需要消化的時(shí)間相差很大，通常以消化后可以充分打散組織為宜。
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