細(xì)胞名稱 肝永生化細(xì)胞；THLE-3
形態(tài)特性: 上皮細(xì)胞
生長(zhǎng)特性: 貼壁生長(zhǎng)
特征特性: THLE-2(ATCCCRL-10149和THLE-3(ATCCCRL-11233)細(xì)胞系是正常肝細(xì)胞用SV40大T抗原轉(zhuǎn)染得到。將含有SV40T抗原的BglI-HpaI片段的逆轉(zhuǎn)錄病毒載體導(dǎo)入兼嗜性包裝細(xì)胞株P(guān)A317中病毒。THLE-2andTHLE-3表達(dá)正常成人肝上皮細(xì)胞特征性的表型。當(dāng)注射到無(wú)胸腺裸鼠中時(shí)，它們不成瘤，具有接近二倍體的核型，不表達(dá)甲胎蛋白。
培養(yǎng)條件: CloneticsCorporation,Walkersville,MD21793的BEGM培養(yǎng)基(目錄號(hào)CC3170)。套裝包含了500毫升基本培養(yǎng)基及分別凍存的添加劑，我們不用其中的GA和Epinephrine但另外添加了5ng/mlEGF,70ng/mlPhosphoethanolamine。
傳代方法: 消化3-5分鐘。1:2。3天內(nèi)可長(zhǎng)滿。
傳代情況: PN5
凍存條件: 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+8%DMSO+20%FBS
支原體檢測(cè): 陰性
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產(chǎn)品名稱 | 肝永生化細(xì)胞；THLE-3 |
生長(zhǎng)特性 | 貼壁生長(zhǎng) |
貨號(hào) | EY-X63903 |
產(chǎn)品特點(diǎn):
1、 使用方便:不需昂貴設(shè)備。
2、 可以處理各種細(xì)菌菌體，包括新鮮菌液和冰凍菌體。
3、 將蛋白提取的時(shí)間縮短至30分鐘-1小時(shí)。
4、 采用溫和的中性裂解組分，保持蛋白活性。
5、 含蛋白穩(wěn)定劑，提取的蛋白穩(wěn)定。
6、 紫外檢測(cè)蛋白濃度時(shí)，背景干擾低。
7、 蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制劑配方優(yōu)化。蛋白酶抑制劑混合物包含6種獨(dú)立的蛋白酶抑制劑；每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優(yōu)化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性，包括蛋白酶、半酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶等。
8、 本試劑盒中不有EDTA，與金屬螯和層析等兼容。
培養(yǎng)操作步驟 ：
1．用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；
2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；
3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；
4．將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；
5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。
實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說(shuō)明：
1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過(guò)鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕；
4．如果需要更多生長(zhǎng)狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過(guò)大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率；
5．如果細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
操作流程：
1.1主要試劑與儀器：倒置相差顯微鏡（日本 olympus imt-413），co2孵箱（日本yamato it-61）。
1.2 hek-293細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng)傳代及凍存：
1.2.1 細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動(dòng),使之迅速融化。 將溶解的細(xì)胞凍存管取出,用酒精消毒后打開(kāi),吸出溶有細(xì)胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液（37℃預(yù)熱，8～10倍體積）離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細(xì)胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)，在37℃、5％co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
1.2.2 細(xì)胞傳代 原代培養(yǎng)的hek－293細(xì)胞48h換液1次，細(xì)胞長(zhǎng)至60%～70%融合時(shí)，用0.25%消化1～2min，將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細(xì)胞脫壁、懸浮、分散，為使細(xì)胞進(jìn)一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次，獲得細(xì)胞懸液，然后加入倍量的培養(yǎng)基，溫和混勻，吸管分裝混合液，傳代擴(kuò)增細(xì)胞。
1.3 細(xì)胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細(xì)胞的生長(zhǎng)情況及形態(tài)特征。
1.4 細(xì)胞的計(jì)數(shù) 常規(guī)消化細(xì)胞，待細(xì)胞變圓、脫壁并浮起，加入少量培養(yǎng)基離心，再用pbs重懸并吹打制成細(xì)胞懸液。在細(xì)胞計(jì)數(shù)板蓋玻片的一側(cè)加微量細(xì)胞懸液，用10×物鏡觀察計(jì)數(shù)板四角大方格細(xì)胞數(shù)，按公式計(jì)算出細(xì)胞數(shù)。細(xì)胞數(shù)/ml原液＝(四方格細(xì)胞數(shù)之和/4) ×104。
1.5 細(xì)胞的貼壁率 指數(shù)生的細(xì)胞，以0.25％消化成單細(xì)胞懸液，計(jì)數(shù)后分別接種于12個(gè)25cm2培養(yǎng)瓶中，每?jī)尚r(shí)隨機(jī)取出3瓶細(xì)胞，吸除培養(yǎng)基及未貼壁細(xì)胞，加入胰消化酶消化、計(jì)數(shù)已貼壁細(xì)胞，取其平均值，按照公式：貼壁率(%)=(已貼壁細(xì)胞數(shù)/接種細(xì)胞數(shù)) ，計(jì)算貼壁率。
1.6 生長(zhǎng)曲線 取指數(shù)生的細(xì)胞用消化制成單細(xì)胞懸液，以1×104/孔接種于24孔板，每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機(jī)取3孔，計(jì)數(shù)每孔細(xì)胞的數(shù)目并計(jì)算平均值。
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ATP結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)體B1檢測(cè)試劑盒細(xì)胞名稱: 人肺癌耐藥株；A549/cis形態(tài)特性: 上皮樣ATP-binding cassette transporter B1
磷化tau—199蛋白檢測(cè)試劑
L-別MSK2 (D41A4) XP® Rabbit mAb3,5-二叔丁基
L-Histone H3 (96C10) Mouse mAb (IHC Formulad)氨基-N-甲基芐
L-二甲酯MST1 Antibody(N-BOC-氨基)酸
GSK2636771MST1 Antibody二基三氟化硫
Cbz-L-芐酯5-Carboxylcytosine (5-caC) (D7S8U) Rabbit mAb2-羥基-6-甲基
(+)-2-甲基-L-GAPDH (14C10) Rabbit mAb (HRP Conjuga)吡硫鈉
3,二基-L-氨酸TRADD (7G8) Rabbit mAb異己酰
α-甲基-L-氨酸TRADD (7G8) Rabbit mAb5-氨基-2-溴-甲基吡啶
L-天冬氨酸二甲酯鹽酸鹽TCEB3/Elongin A Antibody2--甲基-5-氟吡啶
L-半甲酯鹽酸鹽p27 Kip1 (D69C12) XP® Rabbit mAb2-溴-5-氟-甲基吡啶
甲酯鹽酸鹽p27 Kip1 (D69C12) XP® Rabbit mAb2-(三氟甲基)酸
L-二甲酯鹽酸鹽HMGCS1 (D5W8F) Rabbit mAb1-氟--5-
L-甲酯鹽酸鹽ASM AntibodyN-叔丁基哌
L-異甲酯鹽酸鹽p27 Kip1 (D37H1) Rabbit mAb2,6-二叔丁基-甲基吡啶
L-氨酸甲酯鹽酸鹽Phospho-eEF2k (Ser366) Antibody肼基甲酸
L-甲酯鹽酸鹽Phospho-eEF2k (Ser366) AntibodyN-(2-甲氧基基)甲基
L-甲酯鹽酸鹽eEF2k Antibody2-基-5-嘧啶
L-甲酯鹽酸鹽Perforin Antibody (Mouse Specific)5-溴-2-基嘧啶
L-甲酯TRADD Antibody
L-半酯鹽酸鹽LIN28A (D84C11) XP® Rabbit mAb二酸單甲酯鹽
L-氨酸酯鹽酸鹽GATA-4 (D3A3M) Rabbit mAb2-羥基嘧啶鹽酸鹽
酯鹽酸鹽DR5 Antibody2-溴-4'-(三氟甲基)酮
L-蛋氨酸酯鹽酸鹽;L-酯鹽酸鹽FLCN (D14G9) Rabbit mAb二氟酸酯
L-酯鹽酸鹽p27 Kip1 (SX53G8.5) Mouse mAb2-硝基三氟甲
L-天冬氨酸-β-芐酯/L-天冬氨酸-芐酯p27 Kip1 (SX53G8.5) Mouse mAb1,2-二氫-2-異丁氧基喹啉-1-甲酸異丁酯
L--γ-芐酯MyD88 Antibody甲氧基酸甲酯
L-氨酸芐酯鹽酸鹽β-Actin (8H10D10) Mouse mAb2-巰基
L-芐酯鹽酸鹽β-Actin (8H10D10) Mouse mAb甲基-5-羥甲基咪唑鹽酸鹽
L--L-鹽TRAIL (C92B9) Rabbit mAb (PE Conjuga)5-羥甲基噻唑
L--α-酮戊二酸鹽（2:1）GRB10 Antibody(二甲氨基)縮二甲
S-酰半鹽酸Phospho-SHP-2 (Tyr580) Antibody(3AR,4R,5R,6AS)-基六氫-2-氧代-2H-環(huán)戊并[B]呋喃-5-基 [1,1'-聯(lián)]-甲酸酯
O-叔丁基-L-甲酯鹽酸鹽ZO-3 (D57G7) XP® Rabbit mAb2,二氨基-5-溴吡啶
L-氨酸異酯鹽酸鹽ZO-3 (D57G7) XP® Rabbit mAb甲基-2-并噻唑啉酮腙鹽酸鹽水合物
L-叔丁酯TNF-α Antibody-硝
L-天冬酰甲酯鹽酸鹽JNK1 (2C6) Mouse mAb2-酸
L-天冬氨酸二叔丁基酯鹽酸鹽TGF-β (56E4) Rabbit mAb硫代嗎啉-1,1-二氧化物
as9-533形態(tài)特性: 上皮樣Crimean-Congo hemorrhagic fever
肝永生化細(xì)胞；THLE-3表沒(méi)食子兒茶素970-74-1英文名：(−)-Epigallocatechin
英文別名：epi-;(-)-EGC;(-)-EGC;NSC 674039;Sunphenon EGC;epigallocatechol;EPIGALLOCATECHIN;Galloepicatechin;Greenteacatechins;l-epigallocatechin
CAS登錄號(hào)：970-74-1
分子式：C15H14O7
分子量：306.27
分子結(jié)構(gòu)：
外觀：白色粉末
規(guī)格：20 mg/支
純度：≥ 98%
用途：用于含量測(cè)定/鑒定/藥理實(shí)驗(yàn)等。
提取來(lái)源：綠茶中提取得到。
溶解性：溶于，乙醇，不溶于。
熔點(diǎn)：208-210°C
旋光度：-50 º (c=0.04, EtOH)
藥理藥效：具有很好的抗氧化活性，今年研究該化合物也具有一定的抗腫瘤活性。
貯存條件： 4℃冷藏、密封、避光
有效期： 2年
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