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產(chǎn)品名稱 | SV40轉(zhuǎn)染成骨細(xì)胞；hFOB1.19 |
生長特性 | 貼壁生長 |
貨號 | EY-X63492 |
細(xì)胞名稱 SV40轉(zhuǎn)染成骨細(xì)胞；hFOB1.19
形態(tài)特性:
生長特性: 貼壁生長
特征特性: 在0.6mg/mlG418存在下，用溫度敏感的表達(dá)載體pUCSVisA58轉(zhuǎn)染自然流產(chǎn)的胎兒四肢組織，建立了此細(xì)胞系。在許可溫度33.5oC下細(xì)胞分裂很快，而在限制溫度39.5oC下細(xì)胞極少分裂或不分裂。這些細(xì)胞具有分化為表達(dá)造骨細(xì)胞表型的成熟造骨細(xì)胞的能力。這些細(xì)胞提供了一個(gè)同質(zhì)化的快速增殖模型系統(tǒng)，用于研究正常人造骨細(xì)胞的分化，造骨細(xì)胞生理和激素，生長因子，和對造骨細(xì)胞的功能及分化有影響的細(xì)胞因子。
培養(yǎng)條件: DMEM/F12(1:1):Ham'sF12/DMEMedium(DMEH-16/F-1250%Mixturew/oHEPES,withNEAAMedium)優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%；0.3mg/mlG418
傳代方法: 消化3-5分鐘。1:2。3天內(nèi)可長滿。
傳代情況: PN5
凍存條件: 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+8%DMSO+20%FBS
支原體檢測: 陰性
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產(chǎn)品特點(diǎn):
1、 使用方便:不需昂貴設(shè)備。
2、 可以處理各種細(xì)菌菌體，包括新鮮菌液和冰凍菌體。
3、 將蛋白提取的時(shí)間縮短至30分鐘-1小時(shí)。
4、 采用溫和的中性裂解組分，保持蛋白活性。
5、 含蛋白穩(wěn)定劑，提取的蛋白穩(wěn)定。
6、 紫外檢測蛋白濃度時(shí)，背景干擾低。
7、 蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制劑配方優(yōu)化。蛋白酶抑制劑混合物包含6種獨(dú)立的蛋白酶抑制劑；每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優(yōu)化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性，包括蛋白酶、半酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶等。
8、 本試劑盒中不有EDTA，與金屬螯和層析等兼容。
培養(yǎng)操作步驟 ：
1．用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；
2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；
3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；
4．將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；
5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。
實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說明：
1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率；
5．如果細(xì)胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
操作流程：
1.1主要試劑與儀器：倒置相差顯微鏡（日本 olympus imt-413），co2孵箱（日本yamato it-61）。
1.2 hek-293細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng)傳代及凍存：
1.2.1 細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動(dòng),使之迅速融化。 將溶解的細(xì)胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細(xì)胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液（37℃預(yù)熱，8～10倍體積）離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細(xì)胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶內(nèi)，在37℃、5％co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
1.2.2 細(xì)胞傳代 原代培養(yǎng)的hek－293細(xì)胞48h換液1次，細(xì)胞長至60%～70%融合時(shí)，用0.25%消化1～2min，將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細(xì)胞脫壁、懸浮、分散，為使細(xì)胞進(jìn)一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次，獲得細(xì)胞懸液，然后加入倍量的培養(yǎng)基，溫和混勻，吸管分裝混合液，傳代擴(kuò)增細(xì)胞。
1.3 細(xì)胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細(xì)胞的生長情況及形態(tài)特征。
1.4 細(xì)胞的計(jì)數(shù) 常規(guī)消化細(xì)胞，待細(xì)胞變圓、脫壁并浮起，加入少量培養(yǎng)基離心，再用pbs重懸并吹打制成細(xì)胞懸液。在細(xì)胞計(jì)數(shù)板蓋玻片的一側(cè)加微量細(xì)胞懸液，用10×物鏡觀察計(jì)數(shù)板四角大方格細(xì)胞數(shù)，按公式計(jì)算出細(xì)胞數(shù)。細(xì)胞數(shù)/ml原液＝(四方格細(xì)胞數(shù)之和/4) ×104。
1.5 細(xì)胞的貼壁率 指數(shù)生的細(xì)胞，以0.25％消化成單細(xì)胞懸液，計(jì)數(shù)后分別接種于12個(gè)25cm2培養(yǎng)瓶中，每兩小時(shí)隨機(jī)取出3瓶細(xì)胞，吸除培養(yǎng)基及未貼壁細(xì)胞，加入胰消化酶消化、計(jì)數(shù)已貼壁細(xì)胞，取其平均值，按照公式：貼壁率(%)=(已貼壁細(xì)胞數(shù)/接種細(xì)胞數(shù)) ，計(jì)算貼壁率。
1.6 生長曲線 取指數(shù)生的細(xì)胞用消化制成單細(xì)胞懸液，以1×104/孔接種于24孔板，每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機(jī)取3孔，計(jì)數(shù)每孔細(xì)胞的數(shù)目并計(jì)算平均值。
rmIL-17 RD/SEF (50 UG)細(xì)胞名稱: 小鼠雜交瘤細(xì)胞；HBKC-57 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS
rmIL-17 RC, CF (50 UG)細(xì)胞名稱: 小鼠雜交瘤細(xì)胞；HBMY-904 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS
rmIL-17 R/Fc, CF (100 UG)細(xì)胞名稱: 小鼠雜交瘤細(xì)胞；HBS6F1 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS
rmIL-15Ra/Fc, CF (100 UG)細(xì)胞名稱: 小鼠雜交瘤細(xì)胞；HBCEP16-2B RPMI1640(w/oHepes)10%FBS
rmIL-15, CF (10 UG)細(xì)胞名稱: 中國倉鼠卵巢細(xì)胞（亞系克?。?；CHO1beta9,12.5Clone36 DMEM/F12(1:1):Ham'sF12/DMEMedium(DMEH-16/F-1250%Mixturew/oHEPES,withNEAAMedium)10%FBS
rmIL-15 (10 UG)細(xì)胞名稱: 小鼠雜交瘤細(xì)胞；HBCEP24G-9G4 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS
rmIL-13, CF (5 UG)細(xì)胞名稱: 敘利亞倉鼠細(xì)胞系；SyrianHamsterAV12 MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)10%FBS
rmIL-13, CF (25 UG)細(xì)胞名稱: 小鼠雜交瘤細(xì)胞；HBBrE-1 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS
rmIL-13 Ra2/Fc, CF (100 UG)細(xì)胞名稱: 小鼠雜交瘤細(xì)胞；HBBFR87-124 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS
rmIL-13 Ra1/Fc, CF (200 UG)細(xì)胞名稱: 小鼠雜交瘤細(xì)胞；HBPBA5 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS
rmIL-13 Ra1/Fc (200 UG)細(xì)胞名稱: 中國倉鼠卵巢細(xì)胞（亞系克?。?；CHODUXB11CarryingpBSCRLc/pTCSgptclone35.6 DMEM/F12(1:1):Ham'sF12/DMEMedium(DMEH-16/F-1250%Mixturew/oHEPES,withNEAAMedium)10%FBS
rmIL-13 (5 UG)細(xì)胞名稱: 小鼠雜交瘤細(xì)胞系；L/1C2 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS
rmIL-13 (25 UG)細(xì)胞名稱: 小鼠雜交瘤細(xì)胞；HBBFR87-70 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS
rmIL-12, CF (50 UG)細(xì)胞名稱: 小鼠雜交瘤細(xì)胞；HB9.4 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS
rmIL-12, CF (10 UG)細(xì)胞名稱: 小鼠雜交瘤細(xì)胞；HBG17-2 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS
rmIL-12 Rb1, CF (50 UG)細(xì)胞名稱: 小鼠雜交瘤細(xì)胞；HB9.6 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS
SV40轉(zhuǎn)染成骨細(xì)胞；hFOB1.19人基質(zhì)γ羧基谷氨蛋白(MGP)ELISA試劑盒NGALELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
人甘露糖結(jié)合蛋白/甘露糖結(jié)合凝集素(MBP/MBL)ELISA試劑盒NGBELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
人白細(xì)胞彈性蛋白酶(HLE)ELISA試劑盒NGBELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
人成骨生長肽(OGP)ELISA試劑盒NGBELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
人硫氧化還原蛋白(Trx)ELISA試劑盒NGBELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
人硫氧還蛋白還原酶(TrxR)ELISA試劑盒NGFELISAkit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
人蛋白磷酶(PP)ELISA試劑盒NGFELISAkit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
人卵清蛋白特異性IgE(OVAsIgE)ELISA試劑盒NGFELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
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