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產(chǎn)品名稱 | 乳腺癌細(xì)胞；MDA-MB-231 |
生長特性 | 貼壁生長 |
貨號 | EY-X63231 |
細(xì)胞名稱 乳腺癌細(xì)胞；MDA-MB-231
形態(tài)特性: 上皮樣
生長特性: 貼壁生長
特征特性: MDA-MB-231是從一名51歲的白人女性乳腺癌患者的胸水中分離建立的。該細(xì)胞表達(dá)表皮生長因子EGF受體、TGF-α受體和WNT7B癌基因。
培養(yǎng)條件: L15:LeibovitzMedium10%FBS
傳代方法: 1:2~1:4傳代；每周2~3次。
傳代情況: C5
凍存條件: 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+8%DMSO+20%FBS
支原體檢測: 培養(yǎng)法（-）
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產(chǎn)品特點:
1、 使用方便:不需昂貴設(shè)備。
2、 可以處理各種細(xì)菌菌體，包括新鮮菌液和冰凍菌體。
3、 將蛋白提取的時間縮短至30分鐘-1小時。
4、 采用溫和的中性裂解組分，保持蛋白活性。
5、 含蛋白穩(wěn)定劑，提取的蛋白穩(wěn)定。
6、 紫外檢測蛋白濃度時，背景干擾低。
7、 蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制劑配方優(yōu)化。蛋白酶抑制劑混合物包含6種獨立的蛋白酶抑制劑；每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優(yōu)化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性，包括蛋白酶、半酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶等。
8、 本試劑盒中不有EDTA，與金屬螯和層析等兼容。
培養(yǎng)操作步驟 ：
1．用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；
2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；
3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時；
4．將經(jīng)過計數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；
5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。
實驗要點及說明：
1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機(jī)率；
5．如果細(xì)胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
操作流程：
1.1主要試劑與儀器：倒置相差顯微鏡（日本 olympus imt-413），co2孵箱（日本yamato it-61）。
1.2 hek-293細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng)傳代及凍存：
1.2.1 細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動,使之迅速融化。 將溶解的細(xì)胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細(xì)胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液（37℃預(yù)熱，8～10倍體積）離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細(xì)胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶內(nèi)，在37℃、5％co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
1.2.2 細(xì)胞傳代 原代培養(yǎng)的hek－293細(xì)胞48h換液1次，細(xì)胞長至60%～70%融合時，用0.25%消化1～2min，將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細(xì)胞脫壁、懸浮、分散，為使細(xì)胞進(jìn)一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次，獲得細(xì)胞懸液，然后加入倍量的培養(yǎng)基，溫和混勻，吸管分裝混合液，傳代擴(kuò)增細(xì)胞。
1.3 細(xì)胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細(xì)胞的生長情況及形態(tài)特征。
1.4 細(xì)胞的計數(shù) 常規(guī)消化細(xì)胞，待細(xì)胞變圓、脫壁并浮起，加入少量培養(yǎng)基離心，再用pbs重懸并吹打制成細(xì)胞懸液。在細(xì)胞計數(shù)板蓋玻片的一側(cè)加微量細(xì)胞懸液，用10×物鏡觀察計數(shù)板四角大方格細(xì)胞數(shù)，按公式計算出細(xì)胞數(shù)。細(xì)胞數(shù)/ml原液＝(四方格細(xì)胞數(shù)之和/4) ×104。
1.5 細(xì)胞的貼壁率 指數(shù)生的細(xì)胞，以0.25％消化成單細(xì)胞懸液，計數(shù)后分別接種于12個25cm2培養(yǎng)瓶中，每兩小時隨機(jī)取出3瓶細(xì)胞，吸除培養(yǎng)基及未貼壁細(xì)胞，加入胰消化酶消化、計數(shù)已貼壁細(xì)胞，取其平均值，按照公式：貼壁率(%)=(已貼壁細(xì)胞數(shù)/接種細(xì)胞數(shù)) ，計算貼壁率。
1.6 生長曲線 取指數(shù)生的細(xì)胞用消化制成單細(xì)胞懸液，以1×104/孔接種于24孔板，每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機(jī)取3孔，計數(shù)每孔細(xì)胞的數(shù)目并計算平均值。
615小鼠樹突狀細(xì)胞肉瘤瘤株；DCS形態(tài)特性: 實體瘤生長特性: 體內(nèi)生長Human CD30 ELISA KIT
小鼠Lewis肺癌瘤株；LLT形態(tài)特性: 實體瘤生長特性: 體內(nèi)生長Human TIMP-1 ELISA KIT
小鼠黑色素瘤瘤株；B16形態(tài)特性: 實體瘤生長特性: 體內(nèi)生長Human Furin ELISA KIT
BALB/C小鼠肝瘤株；BNL1MEA.7R.1形態(tài)特性: 實體瘤生長特性: 體內(nèi)生長Human MIP-1-β ELISA KIT
Human RAB11FIP2 ELISA Kit
狗腎注意事項: 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或治療，非藥用，非食用三(2-噻吩基)膦Human SAA4(Serum amyloid A-4 protein) ELISA Kit
牛胚氣管注意事項: 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或治療，非藥用，非食用4-(溴甲基)苯甲酸甲酯Human RAB11FIP3 ELISA Kit
人神經(jīng)母瘤拉丁屬名: Saccharomyces cerevisiae4-(溴甲基)苯甲酸甲酯Human ENPP1(Ectonucleotide pyrophosphatase/phosphodiesterase family member 1) ELISA Kit
人成神經(jīng)瘤拉丁屬名: Monilinia fructicola 4-(溴甲基)苯甲酸甲酯Human RAB11FIP5 ELISA Kit
人髓母瘤拉丁屬名: Streptomyces piomogenesN(e)-Boc-L-賴氨酸Human PVRL4 ELISA Kit
人胎盤絨毛注意事項: 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或治療，非藥用，非食用N(e)-Boc-L-賴氨酸Human PXMP2 ELISA Kit
人橫紋肌肉瘤拉丁屬名: Saccharomyces cerevisiae HansenN(e)-Boc-L-賴氨酸Human PWP1 ELISA Kit
人惡性胚胎橫紋肌肉瘤拉丁屬名: Idiomarina
乳腺癌細(xì)胞；MDA-MB-231小鼠內(nèi)皮型一氧化氮合成酶(eNOS)ELISA試劑盒AFP-L1ELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
小鼠誘導(dǎo)型一氧化氮合成酶(iNOS)ELISA試劑盒AFP-L2ELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
小鼠一氧化氮合成酶(NOS)ELISA試劑盒AFP-L3ELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
小鼠抗心肌抗體(AMA)ELISA試劑盒AFUELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
小鼠抗IVIgG抗體ELISA試劑盒AFUELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
小鼠抗IgE受體抗體ELISA試劑盒AFUELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
小鼠胰島素原(PI)ELISA試劑盒AFUELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
小鼠αL巖藻糖苷酶(AFU)ELISA試劑盒AGAAELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
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