本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA），專用于定量檢測(cè)小鼠血清、血漿、組織勻漿及細(xì)胞上清液中的磷酸化核因子-κB（p-NF-κB）蛋白濃度。檢測(cè)范圍覆蓋0.313-20 ng/mL，靈敏度達(dá)0.16 ng/mL，適用于炎癥反應(yīng)、免疫調(diào)控及腫瘤相關(guān)信號(hào)通路研究等領(lǐng)域。
產(chǎn)品名稱 |
小鼠磷酸化核因子-κBelisa試劑盒 | 英文名稱 | p-NF-κB ELISA Kit |
貨號(hào) | CS-0904E | 規(guī)格 | 48T/96T |
保存 | 避光保存 | 用途 | 僅供科研實(shí)驗(yàn) |
核心原理：
?固相化?：微孔板預(yù)先包被抗小鼠p-NF-κB抗體。
?結(jié)合?：加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣本，p-NF-κB被固相抗體捕獲。
?檢測(cè)?：加入化的抗小鼠p-NF-κB抗體和HRP標(biāo)記的親和素，形成"抗體-抗原-酶標(biāo)抗體"復(fù)合物。
?顯色?：加入TMB底物，被HRP催化后由藍(lán)色變?yōu)辄S色。
?測(cè)定?：用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)測(cè)定吸光度(OD值)，濃度與OD值成正比。
樣本要求：
1. 樣本類型與處理
?血清?：使用無熱原/內(nèi)毒素試管采集，避免溶血或脂血。1000×g離心10分鐘分離血清，-20℃保存，避免反復(fù)凍融。
?血漿?：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝，離心后取上清。
?細(xì)胞上清?：1000×g離心10分鐘去除顆粒，-70℃保存。
?組織勻漿?：生理鹽水勻漿后離心取上清，-20℃保存。
2. 注意事項(xiàng)
樣本中禁止添加NaN3，以免抑制HRP活性。
細(xì)胞培養(yǎng)上清可能因細(xì)胞狀態(tài)等因素導(dǎo)致檢測(cè)波動(dòng)，建議設(shè)復(fù)孔。
操作步驟：
試劑準(zhǔn)備將試劑盒平衡至室溫（20-25℃），濃縮洗滌液按 1:20 稀釋備用。標(biāo)準(zhǔn)品按說明書進(jìn)行梯度稀釋，配制系列濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線溶液。
實(shí)驗(yàn)流程加樣：設(shè)置空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔，空白孔僅加稀釋液，其余孔分別加入標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品，37℃孵育。加酶標(biāo)抗體：除空白孔外，每孔加入酶標(biāo)抗體，輕輕混勻，37℃避光孵育。洗滌：棄去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后甩干，重復(fù)洗滌 4-5 次，最后拍干殘留液體。顯色：每孔加入 TMB 顯色液，37℃避光孵育，孔內(nèi)呈現(xiàn)藍(lán)色。終止：每孔加入終止液，混勻后顏色由藍(lán)色轉(zhuǎn)為黃色。檢測(cè)：在 450nm 波長(zhǎng)下測(cè)定各孔 OD 值，15 分鐘內(nèi)完成讀數(shù)。
關(guān)鍵提示實(shí)驗(yàn)全程嚴(yán)格控溫，孵育時(shí)使用封板膜避免蒸發(fā)。洗滌需充分，否則易造成高背景、結(jié)果偏差。顯色液需避光，終止順序與加樣順序保持一致，確保充分混勻。
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