產(chǎn)品簡介：
本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA），專用于定量檢測小鼠血清、血漿、組織勻漿中的 III 型前膠原氨基末端肽（PⅢNP）蛋白濃度。檢測范圍覆蓋 0.313-20 ng/mL，靈敏度達 0.16 ng/mL，適用于肝纖維化、肺纖維化、膠原合成及組織纖維化研究等領(lǐng)域。
產(chǎn)品名稱：小鼠III型前膠原氨基末端肽elisa試劑盒
英文名稱：PⅢNP ELISA Kit
產(chǎn)品規(guī)格：48T/96T
產(chǎn)品貨號：CS-1350E
檢測原理：
小鼠 III 型前膠原氨基末端肽 (PⅢNP) elisa 試劑盒的原理是雙抗體夾心法，通過固相載體捕獲抗原，再用酶標記的檢測抗體進行識別，最后通過底物顯色反應來定量檢測。
固相化：微孔板預先包被抗小鼠 PⅢNP 抗體。
結(jié)合：加入標準品或樣本，PⅢNP 被固相抗體捕獲。
檢測：加入生物su化的抗小鼠 PⅢNP 抗體和 HRP 標記的親和素，形成 "抗體 - 抗原 - 酶標抗體" 復合物。
顯色：加入 TMB 底物，被 HRP 催化后由藍色變?yōu)辄S色。
測定：用酶標儀在 450nm 波長測定吸光度 (OD 值)，濃度與 OD 值成正比。
實驗步驟?：
?試劑準備?：將試劑盒平衡至室溫(20-25℃)，洗滌緩沖液按1:19稀釋。標準品梯度稀釋至所需濃度。
?加樣?：每孔加入100μL標準品或樣本，37℃孵育90分鐘。
?洗滌?：棄去液體，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后甩干，重復5次。
?加檢測抗體?：每孔加入100μL檢測抗體-HRP，37℃孵育60分鐘。
?洗滌?：同步驟3。
?顯色?：每孔加入90μL TMB底物A+B混合液，37℃避光孵育15分鐘。
?終止?：每孔加入50μL終止液，立即搖勻（顏色由藍變黃）。
?檢測?：450nm波長測定吸光度(OD值)，15分鐘內(nèi)完成。
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操作步驟?：
1.加樣孵育
每孔精準加入 100μL 對應標準品 / 待測樣本，空白孔加等量樣本稀釋液；貼封板膜密封微孔板，置于 37℃恒溫孵育箱，避光孵育 90min，保證抗原抗體充分結(jié)合。
2.洗板
輕柔棄去孔內(nèi)液體，吸水紙上快速拍干；每孔加滿洗滌工作液，靜置浸泡 30s，甩干拍凈；重復洗滌5 次，去除未結(jié)合雜質(zhì)，降低背景值。
3.加酶結(jié)合物孵育
除空白孔外，每孔加入 100μL HRP 標記特異性檢測抗體；輕微水平晃板混勻，重新封板，37℃避光恒溫孵育 60min。
4.二次洗板
重復上述洗板操作 5 次，嚴格拍干孔內(nèi)殘留液體，杜絕殘留洗液造成假陽性、數(shù)據(jù)偏差。
5.底物顯色
避光條件下，每孔加入 90μL TMB 底物顯色液，輕柔混勻；37℃避光精準孵育 10~15min，此時液體逐步顯現(xiàn)藍色，顯色深淺與待測物含量正相關(guān)。
6.反應終止
嚴格遵循加樣順序，每孔快速加入 50μL 酸性終止液，輕晃微孔板充分混勻，藍色即刻轉(zhuǎn)為黃色，終止酶促顯色反應。
7.上機讀數(shù)檢測
加終止液后15min 內(nèi)，用酶標儀測定各孔 450nm 波長吸光度（OD 值）；以標準品濃度為橫坐標、OD 值為縱坐標繪制標準曲線，擬合方程計算待測樣本目標蛋白濃度。
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