本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA），專用于定量檢測小鼠血清、血漿、組織勻漿及細胞上清液中的核因子-κB亞基p65親和肽（NF-κB p65）蛋白濃度。檢測范圍覆蓋0.313-20 ng/mL，靈敏度達0.16 ng/mL，適用于炎癥反應、免疫調控及腫瘤進展研究等領域。
產(chǎn)品名稱 |
小鼠核因子-κB亞基p65親和肽elisa試劑盒 | 英文名稱 | NF-κB p65 ELISA Kit |
貨號 | CS-1060E | 規(guī)格 | 48T/96T |
保存 | 避光保存 | 用途 | 僅供科研實驗 |
核心原理：
?固相化?：微孔板預先包被抗小鼠NF-κB p65抗體。
?結合?：加入標準品或樣本，NF-κB p65被固相抗體捕獲。
?檢測?：加入純化的抗小鼠NF-κB p65抗體和HRP標記的親和素，形成"抗體-抗原-酶標抗體"復合物。
?顯色?：加入TMB底物，被HRP催化后由藍色變?yōu)辄S色。
?測定?：用酶標儀在450nm波長測定吸光度(OD值)，濃度與OD值成正比。
樣本要求：
1. 樣本類型與處理
?血清?：使用無熱原/內毒素試管采集，避免溶血或脂血。1000×g離心10分鐘分離血清，-20℃保存，避免反復凍融。
?血漿?：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝，離心后取上清。
?細胞上清?：1000×g離心10分鐘去除顆粒，-70℃保存。
?組織勻漿?：生理鹽水勻漿后離心取上清，-20℃保存。
2. 注意事項
樣本中禁止添加NaN3，以免抑制HRP活性。
細胞培養(yǎng)上清可能因細胞狀態(tài)等因素導致檢測波動，建議設復孔。
關鍵實操技巧：
1.加樣技巧
一次性換新槍頭，垂直貼孔壁低位加液；避免氣泡、飛濺交叉污染；整板加樣速度均勻統(tǒng)一。
2.溫育控溫
須37℃恒溫、封板膜嚴實防蒸發(fā)冷凝；時間嚴格卡死，過長背景高、過短信號低。
3.洗板核心
每孔注滿不溢出，浸泡≥30 s；拍干用無塵吸水紙，杜絕殘留；洗板不足直接高背景、假陽性。
4.樣本規(guī)范
杜溶血、脂濁、污染樣本；禁止反復凍融；嚴禁含 NaN?抑制 HRP 活性；濃度超標只用試劑盒配套稀釋液。
5.顯色與讀數(shù)
全避光；整板顯色時長一致；加終止液立刻讀數(shù)，放置越久數(shù)值漂移越大。
6.基礎質控
樣本、標準均做復孔；室溫潔凈避光操作；試劑分裝取用，減少反復開蓋失效。
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