產(chǎn)品簡介：
本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA），專用于定量檢測小鼠血清、血漿、組織勻漿及細(xì)胞外基質(zhì)提取物中的 Ⅳ 型膠原（Col Ⅳ）蛋白濃度。檢測范圍覆蓋 0.313-20 ng/mL，靈敏度達(dá) 0.16 ng/mL，適用于基底膜重構(gòu)、腫瘤侵襲、肝纖維化及腎病研究等領(lǐng)域。
產(chǎn)品名稱：小鼠Ⅳ型膠原(Col Ⅳ)elisa試劑盒
英文名稱：Col Ⅳ ELISA Kit
產(chǎn)品規(guī)格：48T/96T
產(chǎn)品貨號：CS-1407E
檢測原理：
小鼠 Ⅳ 型膠原 (Col Ⅳ) elisa 試劑盒的原理是雙抗體夾心法，通過固相載體捕獲抗原，再用酶標(biāo)記的檢測抗體進(jìn)行識別，最后通過底物顯色反應(yīng)來定量檢測。
固相化：微孔板預(yù)先包被抗小鼠 Col Ⅳ 抗體。
結(jié)合：加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣本，Col Ⅳ 被固相抗體捕獲。
檢測：加入生物su化的抗小鼠 Col Ⅳ 抗體和 HRP 標(biāo)記的親和素，形成 "抗體 - 抗原 - 酶標(biāo)抗體" 復(fù)合物。
顯色：加入 TMB 底物，被 HRP 催化后由藍(lán)色變?yōu)辄S色。
測定：用酶標(biāo)儀在 450nm 波長測定吸光度 (OD 值)，濃度與 OD 值成正比。
實(shí)驗(yàn)步驟?：
?試劑準(zhǔn)備?：將試劑盒平衡至室溫(20-25℃)，洗滌緩沖液按1:19稀釋。標(biāo)準(zhǔn)品梯度稀釋至所需濃度。
?加樣?：每孔加入100μL標(biāo)準(zhǔn)品或樣本，37℃孵育90分鐘。
?洗滌?：棄去液體，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后甩干，重復(fù)5次。
?加檢測抗體?：每孔加入100μL檢測抗體-HRP，37℃孵育60分鐘。
?洗滌?：同步驟3。
?顯色?：每孔加入90μL TMB底物A+B混合液，37℃避光孵育15分鐘。
?終止?：每孔加入50μL終止液，立即搖勻（顏色由藍(lán)變黃）。
?檢測?：450nm波長測定吸光度(OD值)，15分鐘內(nèi)完成。
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關(guān)鍵實(shí)操技巧：
1.加樣技巧
一次性換新槍頭，垂直貼孔壁低位加液；避免氣泡、飛濺交叉污染；整板加樣速度均勻統(tǒng)一。
2.溫育控溫
須37℃恒溫、封板膜嚴(yán)實(shí)防蒸發(fā)冷凝；時間嚴(yán)格卡死，過長背景高、過短信號低。
3.洗板核心
每孔注滿不溢出，浸泡≥30 s；拍干用無塵吸水紙，杜絕殘留；洗板不足直接高背景、假陽性。
4.樣本規(guī)范
杜溶血、脂濁、污染樣本；禁止反復(fù)凍融；嚴(yán)禁含 NaN?抑制 HRP 活性；濃度超標(biāo)只用試劑盒配套稀釋液。
5.顯色與讀數(shù)
全避光；整板顯色時長一致；加終止液立刻讀數(shù)，放置越久數(shù)值漂移越大。
6.基礎(chǔ)質(zhì)控
樣本、標(biāo)準(zhǔn)均做復(fù)孔；室溫潔凈避光操作；試劑分裝取用，減少反復(fù)開蓋失效。
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