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本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA），專用于定量檢測小鼠血清、血漿、組織勻漿及細胞上清液中的骨成型蛋白受體Ⅱ（BMPR-Ⅱ）蛋白濃度。檢測范圍覆蓋0.313-20 ng/mL，靈敏度達0.16 ng/mL，適用于骨發(fā)育、組織修復(fù)及信號通路調(diào)控研究等領(lǐng)域。

核心原理：

固相化：微孔板預(yù)先包被抗小鼠BMPR-Ⅱ抗體。

結(jié)合：加入標(biāo)準品或樣本，BMPR-Ⅱ被固相抗體捕獲。

檢測：加入純化的抗小鼠BMPR-Ⅱ抗體和HRP標(biāo)記的親和素，形成"抗體-抗原-酶標(biāo)抗體"復(fù)合物。

顯色：加入TMB底物，被HRP催化后由藍色變?yōu)辄S色。

測定：用酶標(biāo)儀在450nm波長測定吸光度(OD值)，濃度與OD值成正比。

樣本要求：

1. 樣本類型與處理

?血清?：使用無熱原/內(nèi)毒素試管采集，避免溶血或脂血。1000×g離心10分鐘分離血清，-20℃保存，避免反復(fù)凍融。

?血漿?：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝，離心后取上清。

?細胞上清?：1000×g離心10分鐘去除顆粒，-70℃保存。

?組織勻漿?：生理鹽水勻漿后離心取上清，-20℃保存。

2. 注意事項

樣本中禁止添加NaN3，以免抑制HRP活性。

細胞培養(yǎng)上清可能因細胞狀態(tài)等因素導(dǎo)致檢測波動，建議設(shè)復(fù)孔。

操作步驟：

1. 試劑準備

將試劑盒所有組分平衡至室溫（20–25℃，≥30min）；濃縮洗滌液按 1:19 稀釋配制工作液。

標(biāo)準品用標(biāo)準品稀釋液復(fù)溶，梯度稀釋，配置系列濃度梯度標(biāo)準溶液，備用。

2. 實驗流程

加樣：設(shè)置空白孔、標(biāo)準孔、樣本孔，每孔加入 100 μL 對應(yīng)標(biāo)準品 / 待測樣本，封板，37℃恒溫孵育 90 min。

洗滌：棄凈孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌工作液，靜置 30 s，甩干拍凈，重復(fù)洗滌 5 次。

加酶結(jié)合物：每孔加入 100 μL HRP 標(biāo)記檢測抗體，封板混勻，37℃孵育 60 min。

洗滌：重復(fù)上述洗滌步驟 5 次，拍干微孔。

顯色：每孔避光加入 90 μL TMB 底物顯色液，輕柔混勻，37℃避光顯色 15 min。

終止：按同等順序每孔快速加入 50 μL 終止液，輕晃混勻，溶液由藍轉(zhuǎn)黃。

讀數(shù)：15 min 內(nèi)，酶標(biāo)儀 450 nm 波長測定各孔 OD 值，擬合標(biāo)準曲線計算樣本含量。

3. 關(guān)鍵質(zhì)控要點

全程孵育使用專用封板膜，防止液體蒸發(fā)、交叉污染。

洗滌充分為實驗核心，殘留洗液易造成背景偏高、假陽性。

TMB 顯色液避光儲存，現(xiàn)用現(xiàn)加，嚴禁接觸氧化劑。

加終止液順序需與顯色加樣一致，避免局部色差、綠色殘留。