本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA），專用于定量檢測(cè)小鼠血清、血漿、組織勻漿及細(xì)胞上清液中的苗條素受體（LR/Ob-R）蛋白濃度。檢測(cè)范圍覆蓋0.313-20 ng/mL，靈敏度達(dá)0.16 ng/mL，適用于體重調(diào)控、能量代謝及肥胖研究等領(lǐng)域。
產(chǎn)品名稱 |
小鼠苗條素受體(LR/Ob-R)elisa試劑盒 | 英文名稱 | LR/Ob-R ELISA Kit |
貨號(hào) | CS-0881E | 規(guī)格 | 48T/96T |
保存 | 避光保存 | 用途 | 僅供科研實(shí)驗(yàn) |
核心原理：
固相化：微孔板預(yù)先包被抗小鼠LR/Ob-R抗體。
結(jié)合：加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣本，LR/Ob-R被固相抗體捕獲。
檢測(cè)：加入化的抗小鼠LR/Ob-R抗體和HRP標(biāo)記的親和素，形成"抗體-抗原-酶標(biāo)抗體"復(fù)合物。
顯色：加入TMB底物，被HRP催化后由藍(lán)色變?yōu)辄S色。
測(cè)定：用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)測(cè)定吸光度(OD值)，濃度與OD值成正比。
樣本要求：
血清：無(wú)熱源無(wú)菌采血管采集，杜絕溶血、脂血污染；1000×g 離心 10 min 分離上清，-20℃分裝保存，嚴(yán)禁反復(fù)凍融。血漿：選用 EDTA / 檸檬酸鹽 / 肝素抗凝管采血混勻，離心去除血細(xì)胞取上清備用（部分試劑盒慎用肝素）。細(xì)胞上清：收集后 1000×g 離心 10 min 去除細(xì)胞碎片與雜質(zhì)，-70~-80℃低溫保存。組織勻漿：預(yù)冷生理鹽水 / PBS 冰上制備勻漿，高速離心取澄清上清，-20℃避光分裝貯存。
操作步驟：
試劑準(zhǔn)備將試劑盒平衡至室溫（20-25℃），濃縮洗滌液按 1:20 稀釋備用。標(biāo)準(zhǔn)品按說(shuō)明書(shū)進(jìn)行梯度稀釋，配制系列濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線溶液。
實(shí)驗(yàn)流程加樣：設(shè)置空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔，空白孔僅加稀釋液，其余孔分別加入標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品，37℃孵育。加酶標(biāo)抗體：除空白孔外，每孔加入酶標(biāo)抗體，輕輕混勻，37℃避光孵育。洗滌：棄去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后甩干，重復(fù)洗滌 4-5 次，最后拍干殘留液體。顯色：每孔加入 TMB 顯色液，37℃避光孵育，孔內(nèi)呈現(xiàn)藍(lán)色。終止：每孔加入終止液，混勻后顏色由藍(lán)色轉(zhuǎn)為黃色。檢測(cè)：在 450nm 波長(zhǎng)下測(cè)定各孔 OD 值，15 分鐘內(nèi)完成讀數(shù)。
關(guān)鍵提示實(shí)驗(yàn)全程嚴(yán)格控溫，孵育時(shí)使用封板膜避免蒸發(fā)。洗滌需充分，否則易造成高背景、結(jié)果偏差。顯色液需避光，終止順序與加樣順序保持一致，確保充分混勻。
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