本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA），專用于定量檢測(cè)小鼠血清、血漿、組織勻漿及細(xì)胞上清液中的大內(nèi)皮素（Big ET）濃度。檢測(cè)范圍覆蓋 0.313-20 ng/mL，靈敏度達(dá) 0.16 ng/mL，適用于血管功能、內(nèi)分泌調(diào)節(jié)及心血管病變研究等領(lǐng)域。
產(chǎn)品名稱 |
小鼠大內(nèi)皮素(Big ET)elisa試劑盒 | 英文名稱 | Big ET ELISA Kit |
貨號(hào) | CS-1163E | 規(guī)格 | 48T/96T |
保存 | 避光保存 | 用途 | 僅供科研實(shí)驗(yàn) |
核心原理：
固相化：微孔板預(yù)先包被抗小鼠 Big ET 抗體。
結(jié)合：加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣本，Big ET 被固相抗體捕獲。
檢測(cè)：加入化的抗小鼠 Big ET 抗體和 HRP 標(biāo)記的親和素，形成 "抗體 - 抗原 - 酶標(biāo)抗體" 復(fù)合物。
顯色：加入 TMB 底物，被 HRP 催化后由藍(lán)色變?yōu)辄S色。
測(cè)定：用酶標(biāo)儀在 450nm 波長(zhǎng)測(cè)定吸光度 (OD 值)，濃度與 OD 值成正比。
樣本要求：
1. 樣本類型與處理
?血清?：使用無(wú)熱原/內(nèi)毒素試管采集，避免溶血或脂血。1000×g離心10分鐘分離血清，-20℃保存，避免反復(fù)凍融。
?血漿?：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝，離心后取上清。
?細(xì)胞上清?：1000×g離心10分鐘去除顆粒，-70℃保存。
?組織勻漿?：生理鹽水勻漿后離心取上清，-20℃保存。
2. 注意事項(xiàng)
樣本中禁止添加NaN3，以免抑制HRP活性。
細(xì)胞培養(yǎng)上清可能因細(xì)胞狀態(tài)等因素導(dǎo)致檢測(cè)波動(dòng)，建議設(shè)復(fù)孔。
關(guān)鍵實(shí)操技巧：
1.加樣技巧
一次性換新槍頭，垂直貼孔壁低位加液；避免氣泡、飛濺交叉污染；整板加樣速度均勻統(tǒng)一。
2.溫育控溫
須37℃恒溫、封板膜嚴(yán)實(shí)防蒸發(fā)冷凝；時(shí)間嚴(yán)格卡死，過(guò)長(zhǎng)背景高、過(guò)短信號(hào)低。
3.洗板核心
每孔注滿不溢出，浸泡≥30 s；拍干用無(wú)塵吸水紙，杜絕殘留；洗板不足直接高背景、假陽(yáng)性。
4.樣本規(guī)范
杜溶血、脂濁、污染樣本；禁止反復(fù)凍融；嚴(yán)禁含 NaN?抑制 HRP 活性；濃度超標(biāo)只用試劑盒配套稀釋液。
5.顯色與讀數(shù)
全避光；整板顯色時(shí)長(zhǎng)一致；加終止液立刻讀數(shù)，放置越久數(shù)值漂移越大。
6.基礎(chǔ)質(zhì)控
樣本、標(biāo)準(zhǔn)均做復(fù)孔；室溫潔凈避光操作；試劑分裝取用，減少反復(fù)開(kāi)蓋失效。
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