細胞的培養(yǎng)方法
以前認為紅細胞、粒細胞、淋巴細胞、巨噬細胞等血細胞都屬終末分化細胞，很難在體外培養(yǎng)生長或僅能短期培養(yǎng)而不能傳代，近年來由于淋巴細胞培養(yǎng)基技術(shù)的發(fā)展，已有血細胞培養(yǎng)成功的報道，正常血細胞在體外培養(yǎng)生長時間短，只有白血病細胞，血友病細胞、淋巴瘤細胞可培養(yǎng)成功并建立細胞系，但多半為EB病毒等致瘤病毒引起的轉(zhuǎn)化細胞，（EBNA檢查陽性），二甲基亞砜（DMSO）處理也可誘導這些細胞分化發(fā)生逆轉(zhuǎn)，表現(xiàn)為正常細胞。所建立的細胞系多半為單核細胞系、B淋巴細胞系、T淋巴細胞系，只在IL-2產(chǎn)品問世后，T細胞才可在體外建系、建株。
血細胞可從外周血中用梯度液通過離心分層后分離獲得。也可從脾臟、扁桃體、淋巴結(jié)中用機械法切碎過篩分離獲得淋巴細胞，從腹腔刺激后的沖洗液中可獲得大量的單核-巨噬細胞，從骨髓中可以獲得前提血細胞，并可培養(yǎng)生長。加入生長因子或某些物質(zhì)有利于細胞純化并促進分化和生長繁殖，例如在淋巴細胞中加入IL-2（TCGF），可促進T細胞生長，建立T淋巴細胞系。在多發(fā)性骨髓瘤細胞（B細胞）培養(yǎng)中，加B細胞生長因子，可建立B細胞系；加入IL-6（或正常淋巴細胞培養(yǎng)48h的培養(yǎng)上清中的IL6）可使B細胞在體外培養(yǎng)，建立了IL-6依賴的B9細胞系。在骨髓單個核細胞培養(yǎng)中加入二羥基3,可使單個核細胞分化為成骨細胞及破骨細胞。
人臍帶血來源方便，采集容易，對母嬰均無傷害。近年來研究表明，臍帶血的血漿中富含許多高水平的造血活性物質(zhì)，具有刺激和促進骨髓造血干/祖細胞增殖、分化和再植能力的功能，是造血生長因子的重要來源。
臍帶血中富含類似于骨髓的造血干細胞，其中CFU-G、BFU-E、CFU-GM近似或高于正常成人骨髓和外周血中的造血干/祖細胞，比骨髓更原始，具有很強的自我復制和再植能力。臍帶血中還含有類似于骨髓的基質(zhì)細胞，對骨髓造血具有支持作用，在體外培養(yǎng)擴增中具有更大的增值能力，是造血干細胞的理想來源，已被應(yīng)用于Fanconi貧血、某些白血病和惡性腫瘤的治療，并容易獲得骨髓造血功能的重建。
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